肿瘤融合基因精准检测
然而，融合基因发生的频率在不同的癌症中存在很大的差异，许多融合基因只存在于特定的癌症亚型。例如，非小细胞肺癌（NSCLC）中ALK融合基因阳性率为3%~7%；仅2%的ROS1融合基因存在于肺癌患者中；所有实体瘤中NTRK基因融合阳性率平均约为1%，而在某些特定肿瘤中却高达90%[1，2]。
基因检测类型： 基于患者对药物的代谢相关基因的多态性，评估不同化疗药物在患者体内代谢反应情况。
缺点：需要高质量的ALK RNA样本，临床大部分是石蜡样本，RNA降解严重，影响检出率，导致假阴性的结果，大于2年的标本不建议使用RT-PCR检测，推荐新鲜肿瘤组织样本。通过PCR引物只能检测已知的融合基因型，无法囊括所有的融合型。
PML-RARA既是分子病因又是治疗靶点，已被做为APL的诊断依据。ATRA通过靶向作用于PML-RARA蛋白的RARA（维甲酸受体α）部分诱导肿瘤细胞分化，砷剂通过靶向作用于PML-RARA蛋白的PML部分促进肿瘤细胞凋亡。
其中思路迪诊断以满分成绩通过了该项室间质评。这一结果再次展现了思路迪诊断检测肿瘤体细胞融合基因变异的准确性、可靠性和规范性，获得了国内权威机构的认可，并证明了思路迪诊断在高通量测序检测方面具备专业能力和质量管理水平。
临床视角 临床实践中，NTRK融合的检测手段日益成熟，包括新一代测序和免疫组化，能够精准捕捉这一融合现象，同时揭示其他基因变异，为个体化治疗提供了关键依据。据统计，虽然在所有肿瘤中的比例仅为0.21%，但在罕见肿瘤如先天性肾癌、婴儿肉瘤等领域，NTRK融合的发现率显著提高。
基因检测中融合是什么意思
1、融合基因的表达产物为融合蛋白。融合蛋白的产生会导致或者促进肿瘤的发生。如慢性粒细胞白血病（CML）的产生。根据构成融合基因的种类，可以分为四大类：（1）由报告基因和功能基因构成的融合基因。
2、白血病融合基因，是白血病的分子生物学特异性标志。近年来，由于分子生物学技术的发展，对白血病细胞分子遗传学改变的了解也不断深入。
3、染色体重排所导致的基因融合是肿瘤中的常见现象，在肿瘤的发生过程中起着非常重要的作用，约占人类癌症发病率的20%。目前，国内外已有多种抑制融合基因的肿瘤靶向治疗药物用于临床，包括伊马替尼/BCR-ABL克唑替尼/EML4-ALK和拉罗替尼/NTRK融合等。
4、检测结果是阳性，就表明存在该BCR-ABL融合基因。BCR/ABL融合基因具有高度酪氨酸激酶活性，激活多种信号传导途径，使细胞过度增殖而使细胞调控发生紊乱。临床上可以根据患者是否存在BCR/ABL融合基因，来选择性地使用分子靶向治疗药物。
5、显著延长患者的生存期，被称为“钻石突变”。ALK基因突变主要表现为融合突变，即该基因与其他基因融合形成的异常基因导致肺腺癌的发生。如果检测结果是ALK未融合，也就是不满足融合突变，那么常见的肺癌靶向药物克唑替尼、色瑞替尼等均无法适用。那么最常用的方法就只有全面化疗或者免疫疗法了。
很多融合基因检测都是检测的RNA水平,如RT-PCR。而基因融合本应先发生...
RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。
要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径。RNA的提取RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。
RT-PCR 是将 RNA 的反转录（RT）和 cDNA 的聚合酶链式扩增（PCR）相结 合的技术。首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA，再以 cDNA 为模板， 扩增合成目的片段。RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基 因表达水平，细胞中 RNA 病毒的含量和直接克隆 特定基因的 cDNA 序列。
实时荧光定量PCR也就是Real-Time PCR，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。至于三者的关系，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到。
gene amplification 为一特异蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下，基因扩增是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。）RT-PCR有时候也会指代实时PCR（real-time PCR）。
融合基因rt-pcr检查报告怎么看
尽管有一些研究使用全转录组测序来检测融合基因，但是由于全转录组测序在病理检测后，肿瘤临床样本多以FFPE为主的，其RNA一般都有部分降解，质量较低。
据报道，目前已发现21种EML4-ALK的融合形式，另外ALK还可能与TFG、KIF5B、KLCPTPNSTRN等基因发生融合，因此ALK融合突变的诊断是存在一定难度的。下表是关于ALK融合突变的诊断方法，及其相应的特点。 表1：ALK基因检测的方法 需要注意，临床常用的三种方法是FISH、Ventana IHC及RT-PCR，三种方法FISH的灵敏度最低。
WB：whole blood 全血（即未经任何方式分部分离的血液）Western Blot，“Western免疫印迹法”。是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。
克隆基因的编码框时，必须从ATG开始或UTR处开始。当你想表达这个基因时，PCR产物必须包括完整的读码框；当你需要该基因融合GFP时，不仅需要从ATG开始，终止密码子必须突变掉，而且目的基因与GFP必须在一个读码框中。
EML4-ALK融合基因检测为什么用RNA逆转录
原来EML4， ALK是两个基因，不应该在同一条mRNA上。但肿瘤细胞内因为某种原因，这两个基因连在了同一条mRNA上，就成了融合基因。此时，用RNA逆转录并测序，就可以知道是融合基因了。
我们首先从遗传信息的传递法则来看目前的诊断技术，生命科学的中心法则是，DNA用来承载遗传信息，DNA转录成为RNA，RNA再翻译成为蛋白质，我们常见的检测技术，基本上就是检测这三种生物大分子的序列信息、表达水平等。 由于RNA非常不稳定，很容易降解，因此目前对RNA进行检测多数在科研阶段，但检测RNA的好处是发现新的融合基因。
此外，研究人员采用包含9种已知的EML4-ALK融合转录物，和ALK RNA水平的多重逆转录聚合酶链反应，检测大规模筛选4500例非小细胞肺癌患者福尔马林固定石蜡包埋组织后报告了2%ALK阳性率。回顾性组织库研究显示，ALK基因重排非小细胞肺癌的发生约占非小细胞肺癌的3%-5%，不同种族的发生率无明显差异。
bcr/abl融合基因的基因检测
1、利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中纵坐标为起始拷贝数的对数，横坐标代表Ct值，然后根据待测样本的Ct值从标准曲线上计算出该样本的起始拷贝数。另外bcr/abl融合基因编码的蛋白P210可以用Western印迹或酶联免疫反应加以检测[10]。
2、BCR/ABL融合基因一般出现在CML患者中，但如果是ALL患者的话预后很不好。
3、检测结果是阳性，就表明存在该BCR-ABL融合基因。BCR/ABL融合基因具有高度酪氨酸激酶活性，激活多种信号传导途径，使细胞过度增殖而使细胞调控发生紊乱。临床上可以根据患者是否存在BCR/ABL融合基因，来选择性地使用分子靶向治疗药物。
4、BCR-ABL是一个特定的基因融合产物，与慢性骨髓性白血病（CML）和某些急性淋巴细胞白血病（ALL）相关。BCR-ABL基因融合是由于两个不同基因的染色体易位事件导致的。具体来说，BCR-ABL是BCR（Breakpoint Cluster Region）和ABL（Abelson）基因的融合，这种基因融合在CML和某些ALL患者中很常见。